स्पोडोप्टेरा फ्रुगीपर्डा के लार्वा पर ऑटोग्रा फा कैलिफ़ोर्निया मल्टीप्लिन्यूक्लेओपोलीहेड्रोवायरस (AcMNPV) की कीटनाशक क्रिया और जैव नियंत्रण प्रभाव

अमूर्त

फॉल आर्मीवर्म, स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपेर्डा, मक्का पर सबसे महत्वपूर्ण कीटों में से एक है, जिसने चीन में हाल ही में आक्रमण किया है। नियंत्रण प्रभाव निर्धारित करने के लिए S.frugiperda के लार्वा पर ऑटोग्राफा कैलिफ़ोर्निका मल्टीपल न्यूक्लियोपॉलीहेड्रोवायरस (AcMNPV), S.frugiperda पर AcMNPV की कीटनाशक गतिविधि और बायोकंट्रोल प्रभाव का अध्ययन और बायोएसे और फ़ील्ड प्रभावकारिता परीक्षण के तरीकों से विश्लेषण किया गया। परिणामों से पता चला कि औसत घातक एकाग्रता (LC)₅₀)एसीएमएनपीवी 2 पर कार्य कर रहा है^राएस.फ्रुगिपेर्डा का इंस्टार लार्वा 2.9x था 10⁷पीआईबी/एमएल. औसत नियंत्रण प्रभावकारिता 10⁷पीआईबी/एमएल एसीएमएनपीवी+बीटी सस्पेंशन(1500 एमएल/एचएम²) S.frugiperda पर 10 को 68.99% था^वांदिन और 15 को 66.87%^वांप्रशासन के अगले दिन। अंत में, मृत कीड़ों की डीएनए समरूपता की पहचान करने के लिए DNAMAN 6.0 सॉफ़्टवेयर का उपयोग किया गया, और परिणामों से पता चला कि मृत कीट और S．Frugiperda के पोलह, लेफ़-8 और लेफ़-9 जीन अनुक्रम 100 थे % समान। उपरोक्त सभी परिणाम यह सत्यापित कर सकते हैं कि AcMNPV S．frugiperda को नियंत्रित करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकता है। यह सुझाव दिया गया है कि 10⁷पीआईबी/एमएल एसीएमएनपीवी＋बीटी सस्पेंशन (1500mL/hm²)उच्च तापमान और प्रकाश के प्रभाव से बचने के लिए एस.फ्रुगिपेर्डा के युवा लार्वा की घटना के चरम पर और धूप वाले दिन शाम 4:00-5:00 बजे के बाद लगाया जाना चाहिए, ताकि वायरस की तैयारी बेहतर ढंग से हो सके भूमिका और S.frugiperda पर इसके नियंत्रण प्रभाव में सुधार।

कीवर्ड: एसीएमएनपीवी;स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपेर्डा;लेपिडोप्टेरानपेस्ट;लार्वा;जैव कीटनाशक;एसीएमएनपीवी＋बीटी सस्पेंशन;कीटनाशक गतिविधि;हरित रोकथाम एवं नियंत्रण

स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपेर्डा एक सर्वाहारी प्रवासी कीट है जो पहली बार 2019 में म्यांमार से चीन में प्रवेश किया और तेजी से चीन के 26 प्रांतों और नगर पालिकाओं के 1,518 जिलों में फैल गया, जिससे चीन की खाद्य सुरक्षा के लिए गंभीर खतरा पैदा हो गया। अब तक, आर्मीवर्म की नियंत्रण रणनीति में, आर्मीवर्म के प्रकोप का नियंत्रण अभी भी रासायनिक कीटनाशकों के भारी उपयोग पर निर्भर करता है।रासायनिक कीटनाशकों का अत्यधिक उपयोग आसानी से कीट प्रतिरोध, पुन: प्रसार और पर्यावरणीय अवशेष और प्रदूषण का कारण बन सकता है।गंभीर समस्याओं की एक श्रृंखला ने आधुनिक कृषि के सतत विकास को गंभीर रूप से प्रतिबंधित कर दिया है। इसलिए, जैविक नियंत्रण विधियों या जैव कीटनाशक प्रतिस्थापन का उपयोग।आर्मीवर्म को नियंत्रित करने के लिए कीटनाशकों का उपयोग अधिक से अधिक महत्वपूर्ण होता जा रहा है और इस पर अधिक ध्यान दिया जा रहा है।

ऑटोग्राफा कैलिफ़ोर्निका मल्टीपल न्यूक्लियोपॉलीहेड्रोवायरस एसीएमएनपीवी एक मल्टी-ग्रेन एंबेडेड न्यूक्लियर पॉलीहेड्रोसिस वायरस है जो अरगिरिया अल्फाल्फा के लार्वा से अलग किया गया है। यह 30 से अधिक प्रकार के लेपिडोप्टेरान कीटों जैसे कि चुकंदर कीट, गोभी कीट, अरगिरिया अरगाइरा और कैलिप्टेरा टेरिस्टोइड्स को संक्रमित कर सकता है। बीटी और अन्य कीटनाशकों और गैर-लक्षित कीट विषाणुओं के साथ मिश्रित प्रकार के सहक्रियावादी के रूप में कई नोक्टुइडे कीटों पर स्पष्ट सहक्रियात्मक प्रभाव पड़ता है, और कीटनाशक स्पेक्ट्रम को और व्यापक बनाता है और कीटनाशक प्रभाव में सुधार करता है।एसीएमएनपीवी, वुहान यूनिओसिस बायोलॉजिकल टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड द्वारा विकसित कीट वायरस का एक नया जैव कीटनाशक है।यह अर्गिरिया अल्फाल्फा न्यूक्लियर पॉलीहेड्रोसिस वायरस और बीटी शक्तिशाली वायरस सिनर्जिस्ट का एक संयोजन है।अच्छी कीटनाशक गतिविधि के साथ, ए को सब्जियों, फलों के पेड़ों, चावल और अन्य क्षेत्रों में व्यापक रूप से लागू किया गया है।इस पेपर में, परमाणु पॉलीहेड्रोसिस वायरस के व्यापक अनुप्रयोग के लिए डेटा समर्थन प्रदान करने के लिए, स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के खिलाफ ऑटोग्राफा कैलिफ़ोर्निका मल्टी-टिपल न्यूक्लियोपॉलीहेड्रोवायरस (एसीएमएनपीवी) की कीटनाशक गतिविधि और जैव नियंत्रण प्रभाव का प्रयोगशाला गतिविधि परख और क्षेत्र प्रयोग द्वारा पता लगाया गया और मूल्यांकन किया गया। मक्के में स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपेर्डा का जैविक नियंत्रण।यह आर्मीवॉर्म के नियंत्रण में एसीएमएनपीवी प्लस बीटी के निलंबन एजेंट के पंजीकरण और अनुप्रयोग के लिए सैद्धांतिक आधार प्रदान करता है।

1.सामग्री और तरीके

1.1वायरस और जैविक एजेंटों का परीक्षण करें

जिस वायरस का परीक्षण किया गया वह ऑटोग्राफा कैलिफ़ोर्निका मल्टीपल न्यूक्लियोपॉलीहेड्रोवायरस (एसीएमएनपीवी) था। 20 मई, 2019 को, स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा को हुबेई प्रांत के जियानताओ शहर में मकई के खेत से एकत्र किया गया था, और वायरस संक्रमण स्क्रीनिंग परीक्षण वुहान यूनिओसिस बायोलॉजिकल टेक्नोलॉजी कंपनी की प्रयोगशाला में आयोजित किया गया था। , लि.(जिसमें ऑटोग्राफा कैलिफ़ोर्निका मल्टीपलन्यूक्लियोपॉलीहेड्रोवायरस एसीएमएनपीवी में स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के खिलाफ उच्च संक्रामक गतिविधि होती है), स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के लार्वा को बढ़ाने और फैलाने के लिए उठाया गया था। वायरस से संक्रमित मृत लार्वा को पानी के साथ जमीन पर रखा गया था, धुंध की 3 परतों के माध्यम से फ़िल्टर किया गया था, और छान लिया गया था 600r/मिनट और 300r/मिनट पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। माइक्रोकाउंट 1.8 ×10 था¹⁰वायरलेंट पॉलीहेड्रा प्रति एमएल (पॉलीहेड्रालिनक्लूजनबॉडी पीआईबी), यानी, पॉलीहेड्रोसिस वायरस का शुद्ध तकनीकी ग्रेड प्राप्त करने के लिए (1.8 x 10)¹⁰पीआईबी/एमएल), कम तापमान में संरक्षित करें और अलग रख दें।

परीक्षण किया गया जैविक एजेंट ऑटोग्राफा कैलिफ़ोर्निया न्यूक्लियर पॉलीहेड्रोसिस था। लघु एसीएनपीवी.बीटी (1.0 × 107 पीआईबी/एमएल) के लिए बैसिलस थुरिंजिएन्सिस।इसे वुहान यूनियोसिस बायलॉजिकल टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड द्वारा विकसित किया गया है और इसकी सहायक कंपनी वुहान चुकियांग बायोलॉजिकल टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड द्वारा निर्मित किया गया है।

1.2कीड़ों का परीक्षण करें

प्रायोगिक कीट स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा था।20 जुलाई, 2019 को, स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के लार्वा को हुबेई प्रांत के तोंगशान काउंटी के दचांगज़ेन टाउन, बंकियाओ गांव में ग्रीष्मकालीन मकई के खेत से एकत्र किया गया और हुबेई कृषि अकादमी के पादप संरक्षण मृदा और उर्वरक अनुसंधान संस्थान की प्रयोगशाला में वापस लाया गया। विज्ञान। ताजी और कोमल मकई की पत्तियों को डिस्पोजेबल प्लास्टिक पेट्री डिश (व्यास 8 सेमी, ऊंचाई 3 सेमी) में एकल-सिर खिलाया गया।इनडोर फीडिंग की स्थिति थी:(25±1) ℃ और सापेक्ष आर्द्रता 60%-70%, फोटोपीरियड 16एल:8डी है।प्रजनन की कई पीढ़ियों के बाद, ताजा और निष्फल अंडे के ब्लॉक को उपयोग के लिए रखा जाता है।

1.3स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के विरुद्ध ऑटोग्राफा कैलिफ़ोर्निका मल्टीपल न्यूक्लियोपॉलीहेड्रोवायरस (एसीएमएनपीवी) की प्रयोगशाला गतिविधि

छह सांद्रण प्रवणताएँ, 1.0 ×10⁹, 1.0 ×10⁸, 1.0 ×10⁷, 1.0 ×10⁶, 1.0 ×10⁵, 1.0 ×10⁴इस प्रयोग में डिज़ाइन किए गए थे। सबसे पहले, AcNPV की TC को 1.0 ×10 तक पतला किया गया था⁹पीआईबी/एमएल, और फिर अलग-अलग सांद्रता वाले अन्य मंदक प्राप्त करने के लिए 10 बार पतला किया गया। प्रयोग को खाली नियंत्रण के साथ किया गया। कुल 7 प्रक्रियाएं की गईं, प्रत्येक प्रक्रिया को 3 बार दोहराया गया।

पत्ती खंड आहार विधि को अपनाया गया, अर्थात, ताजी मक्का की युवा पत्तियों (लंबाई 2 सेमी × चौड़ाई 2 सेमी) को पहले वायरस सस्पेंशन स्प्रे से उपचारित किया गया, फिर लार्वा को खिलाया गया, और एकल सिर को पेट्री डिश में खिलाया गया।फीडिंग स्ट्रिप्स थे: तापमान (25±1)℃, चरण-से-आर्द्रता (60% ~ 70%), फोटोपेरियोड (16L:8D)। जहरीली मकई की पत्तियां खाने के बाद, ताजी गैर-विषैली मकई की पत्तियां मिलाई जानी चाहिए तुरंत। आर्मीवर्म के 48 सेकंड इंस्टार लार्वा का बार-बार इलाज किया गया। संदर्भ भाग 9 {9-11}, कीट परिवार की कोशिकाओं और मेजबानों में वायरस के प्रसार के परिवर्तनों को ध्यान में रखते हुए, वायरस के कारण मृत कीड़ों की संख्या और संक्रमण के 7 और 10 दिनों के बाद मृत कीड़ों की कुल संख्या की जांच की गई, और मृत्यु दर की गणना की गई और LC50 की गणना की गई।

1.4आर्मीवर्म लार्वा पर 10 मिलियन एसीएमएनपीवी.बीटी सस्पेंशन के नियंत्रण प्रभाव पर फील्ड परीक्षण

क्षेत्र प्रभावकारिता परीक्षण शियाओयुआन गांव, चुआंगवांग टाउन, तोंगशान काउंटी, हुबेई प्रांत के ग्रीष्मकालीन मक्का क्षेत्र में आयोजित किया गया था।परीक्षण प्लॉट कुल 1500 मीटर का है², मिट्टी का प्रकार कैल्सिक मिट्टी है, पीएच मान 6.8 है, कार्बनिक पदार्थ की मात्रा 13.9% है, और उर्वरता मध्यम से उच्च है। मकई पूरे वर्ष लगाया जाता है, और मकई की किस्म Xiyu नंबर 3 है। 13 जुलाई को ,2020, 45% मिश्रित उर्वरक 750 किग्रा//एचएम²आधार उर्वरक के रूप में प्रयोग कर बोया जायेगा।2019 के बाद से इस क्षेत्र में फॉल आर्मीवर्म की गंभीर घटना हुई है।

कुल 10 मिलियन AcMNPV.BT सस्पेंशन (1500mL/hm²) और 15% इमामेक्टिन बेंजोएट। इंडोकार्ब सस्पेंशन (300mL/hm)²), आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले कीटनाशक और ब्लैंक नियंत्रण को 3 उपचारों से उपचारित किया गया।प्रत्येक उपचार को 4 बार दोहराया गया, जिसमें कुल 12 प्रायोगिक भूखंड थे, प्रत्येक 100 मीटर के क्षेत्र को कवर करता था²

26 अगस्त, 2020 की दोपहर में (जब स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा का लार्वा बार-बार आता है), शाम को एक बार कीटनाशक का छिड़काव करें।लेबैंग ब्रांड 3WBJ-16DZ मल्टी-फ़ंक्शन बैकपैक इलेक्ट्रिक स्प्रे का उपयोग किया जाता है, जिसका कार्य दबाव 0.40~0.60 MPa, छिद्र व्यास 1 मिमी और प्रवाह दर 60~85L/h है।कीटनाशक प्रयोग के दिन धूप रहती है, तापमान 23-32 ℃ होता है।आवेदन के बाद 1, 3, 5, 7, 10 और 15वें दिन सर्वेक्षण करें।जांच के दौरान, प्रत्येक भूखंड से 10 यादृच्छिक नमूना बिंदु लिए गए, और प्रत्येक बिंदु पर 10 पौधों का लगातार सर्वेक्षण किया गया, कुल 100 पौधे।प्रत्येक मकई के पौधे पर जीवित कीड़ों, मौतों, विषाक्तता और प्राकृतिक दुश्मनों की संख्या दर्ज की गई।प्रासंगिक गणना सूत्र इस प्रकार है;

कीट की कमी दर = (प्रयोग से पहले जीवित कीड़ों की संख्या - प्रयोग के बाद जीवित कीड़ों की संख्या)/प्रयोग से पहले जीवित कीड़ों की संख्या

रोकथाम एवं नियंत्रण प्रभाव=(उपचार क्षेत्र में कीट की कमी दर - नियंत्रण क्षेत्र में कीट की कमी दर)/(100- नियंत्रण क्षेत्र में कीट की कमी दर)*100%

1.5ACMNPV की आणविक पहचान

1) वायरस के नमूनों का परीक्षण करें।इनडोर गतिविधि निर्धारण (नमूना 1), जैविक तैयारी 10 मिलियन एसीएमएनपीवी.बीटी एससी (नमूना 2), क्षेत्र प्रभावकारिता परीक्षण के बाद वायरस संक्रमित कीट लाशों (नमूना 3) और संक्रमित आर्मीवर्म की दूसरी पीढ़ी के लार्वा के लिए एसीएमएनपीवी मदर लिकर का चयन करें। परीक्षण वायरस के नमूनों के रूप में नमूना 3 (नमूना 4) में कीट शवों को एकत्र किया गया, यह सत्यापित करने के लिए कि क्या 10 मिलियन एसीएमएनपीवी.बीटी में एसीएमएनपीवी में फॉल आर्मीवॉर्म लार्वा के खिलाफ जीवाणुनाशक गतिविधि है।

2) डीएनए निष्कर्षण.1.0 एमएल एसीएमएनपीवी नमूना लें, 99.0 एमएल आसुत जल डालें, और 1 मिनट के लिए अच्छी तरह से दोलन करें।दोलन के बाद 300μL सस्पेंशन लें, 100μL क्षारीय क्रैकिंग घोल डालें, 30 मिनट के लिए 37 ℃ पर पानी से स्नान करें।200μL ट्रिस·एचसीएल बफर जोड़ें और 8 मिनट के लिए 10000 आर/मिनट पर सेंट्रीफ्यूज करें।सतह पर तैरनेवाला को एक सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में लें, 5μL प्रोटीज़ K और 60 μL SDS डालें, 2 घंटे के लिए 65 ℃ पर पानी से स्नान करें, निकालें और कमरे के तापमान पर ठंडा करें।650μL मिक्स एल ट्रिस संतृप्त फिनोल अच्छी तरह से मिलाएं, 5 मिनट के लिए 10000 आर/मिनट पर सेंट्रीफ्यूज करें, और सतह पर तैरनेवाला को एक नई सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में ले जाएं।फिनोल और क्लोरोफॉर्म (मात्रा अनुपात 1:1) मिश्रण का 650μL मिश्रित तरल जोड़ें, 5 मिनट के लिए 10000 आर/मिनट पर सेंट्रीफ्यूज करें, और फिर सतह पर तैरनेवाला को एक नई सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में ले जाएं।क्लोरोफॉर्म और आइसोमाइल अल्कोहल (मात्रा अनुपात 24:1) का 650μL मिश्रित तरल जोड़ें, 5 मिनट के लिए 10000 आर/मिनट पर सेंट्रीफ्यूज करें, और अंत में सतह पर तैरनेवाला को एक नई सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में ले जाएं।स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके डीएनए सांद्रता को मापें।

3) पीसीआर प्रवर्धन।T3 सुपर मिक्स मानक प्रणाली का उपयोग करना: नमूना DNA 2 μL. पहले और बाद के लिए 0.5μL प्राइमर, T3 सुपर मिक्स 18μL और ddH₂O7μL।पीसीआर प्रवर्धन स्थिति 95 ℃ है।पूर्व विकृतीकरण के 3 मिनट के बाद, निम्नलिखित चक्र निष्पादित होते हैं: 15 सेकंड के लिए 98 ℃, 20 सेकंड के लिए 52 ℃, 20 सेकंड के लिए 72 ℃, और अंत में 5 मिनट के लिए 72 ℃, पूरी तरह से 42 बार चक्र।

4) डीएनए अगारोज जेल वैद्युतकणसंचलन।पीसीआर प्रवर्धन उत्पाद 2μL और 5 केबी डीएनए मार्कर लें और एगरोज़ जेल में डालें, और 20 मिनट के लिए 180 वी पर इलेक्ट्रोफोरेटिक डालें।वैद्युतकणसंचलन के बाद, जेल इमेजिंग प्रणाली में पीसीआर उत्पादों का निरीक्षण करें।

पोल्ह अपस्ट्रीम प्राइमर:

AGGGTTTCCCAGTCACGGGCTGAG-GATCCTTT

पोल्ह डाउनस्ट्रीम प्राइमर:

GAGCGGATAATTTCACACTGGTGTGTG-CAAACTCCTT

लेफ़-8 अपस्ट्रीम प्राइमर:

AGGGTTTCCCAGTCCACGCACGGGAAAT-GAC

लेफ़-8 डाउनस्ट्रीम प्राइमर:

GAGCGGATAATTTCACATTGTACGGATCTTTCGGC

लेफ-9 अपस्ट्रीम प्राइमर

AGGGTTTCCCAGTCACGAAACGGGTACGCGG

लेफ़-9 डाउनस्ट्रीम प्राइमर:

GAGCGGATAATTTCACATTGTCACCGTCAGTC

अंत में, मापे गए पोल्ह, लेफ़-8, और लेफ़-9 अनुक्रमों की तुलना करने के लिए DNAMAN6.0 सॉफ़्टवेयर लागू करें।

1.6डेटा विश्लेषण और प्रसंस्करण

प्रायोगिक डेटा को IBM SPSS 22.0 डेटा सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके संसाधित किया गया था।

वायरस कीटनाशक गतिविधि निर्धारण प्रयोग में, प्रत्येक सांद्रता के साथ उपचारित मृत और जीवित कीड़ों की संख्या की गणना की जाती है, और मृत्यु दर और समायोजित प्रतिशत मृत की गणना की जाती है, और संभाव्यता मूल्यों में परिवर्तित की जाती है।प्रत्येक उपचार की सांद्रता को एलजी मूल्यों में परिवर्तित किया जाता है।विषाणु प्रतिगमन समीकरण (ढलान ± एसई) की गणना कार्यशील संभाव्यता मूल्यों और वजन और एलसी के माध्यम से की जाती है₅₀मान और इसकी 95% विश्वास सीमा, और अंत में ची-स्क्वायर परीक्षण करें(²).क्षेत्र नियंत्रण प्रभाव प्रयोग में, प्रत्येक उपचार में जीवित कीड़ों की संख्या की गणना की गई, कीट में कमी की दर की गणना की गई।नियंत्रण प्रभाव की गणना Microsoft Excel संपादन सूत्र का उपयोग करके की गई थी।विश्लेषण के लिए डंकन की विधि का उपयोग किया गया था, और उपचारों के बीच महत्वपूर्ण अंतरों की तुलना करने के लिए एक-तरफ़ा एनोवा का उपयोग किया गया था,

पाठ में सभी चार्ट Microsoft Excel सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके बनाए गए थे।

2.परिणाम और विश्लेषण

2.1स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा लार्वा के विरुद्ध एसीएमएनपीवी की कीटनाशक गतिविधि

इनडोर गतिविधि परीक्षण (तालिका 1) के परिणाम बताते हैं कि उपचार के 7 दिनों के बाद, एलसी₅₀स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के दूसरे इंस्टार लार्वा पर एसीएमएनपीवी की क्रिया 4.1x10 है⁷पीआईबी/एमएल, और एलसी₉₀1.05x10 है⁸पीआईबी/एमएल.10 दिनों के उपचार के बाद, एल.सी₅₀दूसरे इंस्टार लार्वा पर एसीएमएनपीवी की क्रिया 2.9x10 है⁷पीआईबी/एमएल, और एलसी₉₀7.8x10 है⁷पीआईबी/एमएल.एलसी₅₀और एल.सी₉₀7 दिनों के उपचार के बाद फॉल आर्मीवर्म के दूसरे इंस्टार लार्वा पर एसीएमएनपीवी का प्रभाव 10 दिनों से अधिक था, जो दर्शाता है कि एसीएमएनपीवी ने 7 दिनों में स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा लार्वा के खिलाफ अच्छी कीटनाशक गतिविधि प्रदर्शित की।

2.2 एसीएमएनपीवी का क्षेत्र नियंत्रण प्रभाव।स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपेर्डा लार्वा पर बीटी अधिनियम

क्षेत्र प्रभावकारिता परीक्षणों के परिणामों से पता चला कि 10 मिलियन एसीएमएनपीवी।बीटी एससी (1500 एमएल/एचएम)²) का स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के लार्वा पर अपेक्षाकृत धीमा प्रभाव पड़ा।छिड़काव के बाद पहले, तीसरे और पांचवें दिन औसत नियंत्रण प्रभाव क्रमशः 11.57%, 16.23% और 15.56% था।छिड़काव के 7वें दिन औसत नियंत्रण प्रभाव केवल 21.88% था।हालाँकि, छिड़काव के 10वें दिन, कीट नियंत्रण प्रभाव अचानक बढ़कर 68.99% हो गया, और छिड़काव के 15वें दिन औसत नियंत्रण प्रभाव भी 66.87% था।हालाँकि, रासायनिक एजेंटों की तुलना में इमामेक्टिन बेंजोएट+ इंडोक्सएयर कंडीशनिंगगारब 15% (300mL/hm)²), इसका स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के लार्वा पर अच्छा प्रभाव पड़ा, जो कीट आबादी की संख्या को जल्दी से कम कर सकता है।दवा के बाद पहले, तीसरे, पांचवें और सातवें दिन औसत नियंत्रण प्रभाव क्रमशः 91.39%, 92.66%, 90.71% और 87.19% था।हालाँकि, 10वें दिन औसत नियंत्रण प्रभाव कम होने लगा, केवल 67.63% और 15वें दिन औसत नियंत्रण प्रभाव घटकर 51.60% हो गया।विवरण के लिए तालिका 2 देखें।

साथ ही, हमने यह भी पाया कि उपचार के बाद पहले, तीसरे और पांचवें दिन नियंत्रण क्षेत्र में कीड़ों की कमी की दर नकारात्मक थी, जो कि कीड़ों की संख्या में वृद्धि का संकेत देती है।उपचार के 7वें दिन, यह सकारात्मक होने लगा (कीड़ों की आबादी कम होने लगी)।10वें और 15वें दिनों में कीट की औसत कमी दर क्रमशः 38.25% और 47.00% थी, जो इस तथ्य से काफी हद तक संबंधित है कि स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के कुछ लार्वा मिट्टी में प्यूरीफाई करने लगे और 10-15 दिनों के बाद पीढ़ियों का ओवरलैप हो गया। .

संक्षेप में, यह देखा जा सकता है कि 10 मिलियन ए.सी.एम.एन.पी.वी.बीटी एससी (1500 एमएल/एचएम)²) का स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा पर एक निश्चित नियंत्रण प्रभाव होता है, लेकिन इसका प्रभाव धीमा होता है, और इसकी प्रभावकारिता आवेदन के लगभग 10-15 दिन बाद होती है।

2.3 एसीएमएनपीवी के प्रभाव।प्राकृतिक शत्रुओं पर बीटी

क्षेत्र प्रयोगों के दौरान, 10 मिलियन AcMNPV का प्रभाव।मक्के पर मकड़ियों, भिंडी और भृंग जैसे कीटों के प्राकृतिक शत्रुओं पर बीटी निलंबन की भी जांच की गई।नतीजों से पता चला कि 10 मिलियन एसीएमएनपीवी।बीटी सस्पेंशन से मकड़ियों, लेडीबग्स और बीटल जैसे प्राकृतिक दुश्मनों को कोई महत्वपूर्ण नुकसान नहीं हुआ, प्रति 100 पौधों पर औसतन 13.4 प्राकृतिक दुश्मन थे।हालाँकि, रासायनिक एजेंट इमामेक्टिन बेंजोएट + इंडोक्सेयर कंडीशनिंगारब 15% सस्पेंशन का मकड़ियों, भिंडी और बीटल जैसे प्राकृतिक दुश्मनों पर महत्वपूर्ण विषाक्त प्रभाव पड़ा।उपचार के बाद पहले दिन, मकई के 100 पौधों पर प्राकृतिक शत्रुओं की औसत संख्या केवल 3.1 थी, और उपचार के बाद तीसरे दिन, विभिन्न प्रकार के केवल 5.2 प्राकृतिक शत्रु पाए गए (चित्र 1)।यह देखा जा सकता है कि 10 मिलियन ए.सी.एम.एन.पी.वी.बीटी सस्पेंशन का कीटों के प्राकृतिक शत्रुओं पर अच्छा सुरक्षात्मक प्रभाव पड़ता है, जबकि इमामेक्टिन बेंजोएट + इंडोक्सएयर कंडीशनिंगारब 15% सस्पेंशन प्राकृतिक शत्रुओं को अपेक्षाकृत अधिक नुकसान पहुंचाता है।

2.4 एसीएमएनपीवी की आणविक पहचान

विभिन्न परीक्षण नमूनों के पीसीआर प्रवर्धन परिणामों से पता चला कि नमूने 1, 2, 3 और 4 के पोलह, लेफ-8 और लेफ-9 के प्रवर्धन टुकड़े सुसंगत और आकार में सही थे।पोल्ह, लेफ़-8, और लेफ़-9 जीन के पीसीआर उत्पाद क्रमशः 0.54, 0.716, और 0.29 केबी थे (चित्रा 2), जो साबित करता है कि एसीएमएनपीवी में स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के लार्वा के खिलाफ कीटनाशक गतिविधि है।

अंत में, DNAMAN 6.0 सॉफ़्टवेयर का उपयोग नमूने 1, 2, 3 और 4 (चित्र 3) में पोल्ह, लेफ़-8, और ले.फ़-9 के प्रवर्धित टुकड़ों पर अनुक्रम संरेखण करने के लिए किया गया था।परिणामों से पता चला कि नमूने 1, 2, 3, और 4 में पोलह, लेफ-8, और लेफ-9 के प्रवर्धित अनुक्रमों के बीच समानता 100% थी, जो दर्शाता है कि नमूने 1, 2, 3, और 4 सभी की उत्पत्ति हुई है। वही वायरस AcMNPV.

3. चर्चा

एसीएमएनपीवी एक कीट छड़ी के आकार का वायरस है जो भोजन के माध्यम से कीड़ों के शरीर को संक्रमित करता है।वायरस फैलता है और कीट के पूरे शरीर में फैल जाता है, धीरे-धीरे पूरे शरीर को संक्रमित करता है और अंततः मृत्यु की ओर ले जाता है।इस अध्ययन के नतीजे बताते हैं कि एसीएमएनपीवी में स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के लार्वा के खिलाफ अच्छी जैविक गतिविधि है।7वें और 10वें दिन इसका एलसी क्रमशः 4.1x107 और 2.9x107पीआईबी/एम था, और इसने क्षेत्र में अच्छा नियंत्रण प्रभाव दिखाया।10 मिलियन AcMNPV.Bt (1500 mL/hm) का मिश्रित निलंबन²) उपचार के बाद 10वें और 15वें दिनों में अच्छा औसत नियंत्रण प्रभाव था, जो क्रमशः 68.99% और 66.87% तक पहुंच गया, और प्राकृतिक दुश्मनों के लिए सुरक्षित था।इसलिए, अनुसंधान और विकास की गति तेज की जानी चाहिए ताकि एसीएमएनपीवी स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के जैविक नियंत्रण में बड़ी भूमिका निभा सके।वुहान चुकियांग बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड द्वारा उत्पादित 10 मिलियन एसीएमएनपीवी.बीटी सस्पेंशन एसीएमएनपीवी और बायोपेस्टीसाइड बैसिलस थुरिंगिएन्सिस (बीटी) का एक यौगिक है, जो वायरस की कीटनाशक गतिविधि में काफी सुधार कर सकता है।क्योंकि बीटी अच्छी माइक्रोबियल कीटनाशक गतिविधि वाला एक व्यापक स्पेक्ट्रम कीटनाशक है, जब एसीएमएनपीवी को बीटी के साथ जोड़ा जाता है, तो एकल फॉर्मूलेशन की तुलना में इसकी विषाक्तता में काफी सुधार होना चाहिए।यह न केवल बीटी की कीटनाशक सीमा का विस्तार करता है, बल्कि इसकी विषाक्तता को भी बढ़ाता है, जिससे कई कीटों को नियंत्रित करने के लिए एक ही फॉर्मूलेशन का उपयोग करने का लक्ष्य प्राप्त होता है।यही कारण है कि सब्जियों, फलों के पेड़ों और चावल में 10 मिलियन एसीएमएनपीवी.बीटी के निलंबन को व्यापक रूप से बढ़ावा दिया जा सकता है।इसलिए, 10 मिलियन AcMNPV.Bt को मक्का में स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के लिए हरित नियंत्रण एजेंट के रूप में प्रचारित किया जा सकता है।

इस अध्ययन में, क्षेत्र प्रभावकारिता परीक्षण करते समय, नियंत्रण क्षेत्र में कीड़ों की आबादी में तेजी से गिरावट (15वें दिन कीट की कमी दर 47.00% तक पहुंच गई) के मामले में, 10 मिलियन एसीएमएनपीवी.बीटी का औसत नियंत्रण प्रभाव सस्पेंशन (1500mL/hm²) उपचार के 15वें दिन 66.87% था, जो तेजी से ऊपर की ओर रुझान दर्शाता है।जबकि रासायनिक कीटनाशक का औसत नियंत्रण प्रभाव 15% मेथॉक्साज़ोल · इंडिफेनकार्ब एससी (300 एमएल/एचएम)²) उपचार के 15वें दिन घटकर 51.60% हो गया।हालाँकि यह देखा जा सकता है कि 10 मिलियन AcMNPV.Bt सस्पेंशन (1500 mL/hm)²) 10वें से 15वें दिन स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा पर एक निश्चित नियंत्रण प्रभाव डालता है, जैविक कीटनाशकों की धीमी प्रभावशीलता और स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा लार्वा की छोटी उम्र और ओवरलैपिंग पीढ़ियों को देखते हुए, जांच की संख्या बढ़ाने और जांच का समय बढ़ाने की सिफारिश की जाती है। जैविक कीटनाशकों (विशेष रूप से वायरल तैयारी) के क्षेत्र प्रभावकारिता परीक्षण आयोजित करना, जो अधिक आदर्श प्रयोगात्मक परिणाम प्राप्त कर सकते हैं।यह भी इस अध्ययन की एक सीमा है।संक्षेप में, जैविक एजेंटों की तुलना में, रासायनिक एजेंटों का कीटों पर अपेक्षाकृत अधिक मारक प्रभाव होता है और वे जल्दी से प्रभावी होते हैं।इनका उपयोग कीट प्रकोप के दौरान आपातकालीन रोकथाम और नियंत्रण उपाय के रूप में किया जा सकता है।जब कीटों का नुकसान अपेक्षाकृत हल्का होता है, तो जैविक कीटनाशक हरित रोकथाम और नियंत्रण उपायों में से एक के रूप में रासायनिक कीटनाशकों की जगह ले सकते हैं, जिससे पर्यावरण प्रदूषण कम होता है और कृषि पारिस्थितिकी की रक्षा के प्रभाव को प्राप्त किया जा सकता है।

इसके अलावा, इस अध्ययन में इस्तेमाल किया गया पोलह (पॉलीहेड्रिन) जीन एक प्रकार का पॉलीहेड्रल प्रोटीन प्रमोटर है, यह और पी10 बैकुलोवायरस एक्सप्रेशन वेक्टर सिस्टम (बीईवीएस) में सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला प्रमोटर है, दोनों ही अंतिम चरण में अत्यधिक व्यक्त होते हैं। वायरल संक्रमण का^[13].हालाँकि, पी10 प्रमोटर की गतिविधि पोल्ह प्रमोटर की तुलना में कम है, इसलिए पोल्ह प्रमोटर का उपयोग अक्सर बहिर्जात प्रोटीन की अभिव्यक्ति के लिए किया जाता है।जीन लेफ़-8 वायरस के अपने आरएनए पोलीमरेज़ की सबसे बड़ी सबयूनिट को एनकोड कर सकता है, और यह एक प्रकार का लेट एक्सप्रेशन फ़ैक्टर है^[14].लेफ़-9 एक प्रकार का लेट एक्सप्रेशन फ़ैक्टर है जो बैकुलोवायरस में लेफ़-4, लेफ़-8, और पी47 के साथ प्रोटीन कॉम्प्लेक्स सबयूनिट को सह-एनकोड करता है।शोध में पाया गया है कि लेफ-9 जीन की कमी वाले वायरस संक्रामक गतिविधि वाले वायरस कण उत्पन्न नहीं कर सकते हैं, जबकि लेफ-9 जीन वाले वायरस वायरस की संक्रामक गतिविधि को बहाल करके उसे बहाल कर सकते हैं।इसलिए, संक्रामक गतिविधि के साथ बीवी (बुडेड वायरस) बनाने के लिए बाकुलोवायरस के लिए लेफ-9 जीन एक आवश्यक जीन है।^[15].यह देखा जा सकता है कि लेफ़-8 और लेफ़-9 जीन में विभिन्न प्रकार के परमाणु पॉलीहेड्रोसिस वायरस में उच्च रूढ़िवादिता होती है, इसलिए लेफ़-8 और लेफ़-9 जीन का उपयोग वायरस प्रकारों की पहचान के लिए आधार के रूप में किया जा सकता है।इसलिए, इस अध्ययन में पोल्ह, लेफ़-8, और लेफ़-9 का पता लगाने वाली वस्तुओं के रूप में उपयोग किया गया, और जीन अनुक्रम संरेखण के माध्यम से, समरूपता उच्च थी, सभी 100% तक पहुंच गए।तीव्र आणविक पहचान विधि ने एक बार फिर सत्यापित किया कि एसीएमएनपीवी में स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा के खिलाफ अच्छी कीटनाशक गतिविधि है, जो स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा की रोकथाम और नियंत्रण में आगे प्रचार और अनुप्रयोग के लिए उपयुक्त है।

2019 के बाद से, स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपेर्डा ने चीन पर आक्रमण किया है और मकई का एक महत्वपूर्ण कीट बन गया है।इसने दक्षिणी और दक्षिण-पश्चिमी चीन के कुछ क्षेत्रों में एक बसी हुई आबादी बना ली है, जिससे चीन के मक्का उद्योग को भारी नुकसान हुआ है और चीन की खाद्य सुरक्षा को गंभीर खतरा है।^[16].चीन में स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा की वर्तमान गंभीर रोकथाम और नियंत्रण स्थिति को देखते हुए, स्पोडोप्टेरा फ्रुगिपरडा की रोकथाम और नियंत्रण के लिए कुशल कीटनाशकों की जांच और विकास में तेजी लाना जरूरी है।^[17].यद्यपि वायरल कीटनाशकों ने अपनी धीमी गति की क्रिया और संकीर्ण कीटनाशक स्पेक्ट्रम के कारण अपने व्यापक अनुप्रयोग को सीमित कर दिया है, पारिस्थितिकी और पर्यावरण संरक्षण पर बढ़ते ध्यान के संदर्भ में, कृषि उत्पादन में उनके महत्वपूर्ण लाभों के कारण बैकोलोवायरस कीटनाशकों का व्यापक रूप से उपयोग होने की उम्मीद है। पारंपरिक कीटनाशक.उच्च तापमान, धूप, बारिश और कीटों की उम्र जैसी बाहरी स्थितियों के प्रति कीट विषाणु तैयारियों की संवेदनशीलता के कारण [18]।इसलिए, कीटों के लार्वा की उपस्थिति की चरम अवधि के दौरान कीटनाशकों को लागू करने की सिफारिश की जाती है।उच्च तापमान और प्रकाश जैसी प्रतिकूल पर्यावरणीय परिस्थितियों के प्रभाव से बचने के लिए धूप वाले दिनों में शाम 4:00-5:00 बजे के बाद इसका उपयोग करना सबसे अच्छा है, ताकि वायरस फॉर्मूलेशन अपनी भूमिका बेहतर ढंग से निभा सके और कीटों पर नियंत्रण प्रभाव में सुधार कर सके। .